Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (h) AIRE-1: sc-401225-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) AIRE-1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide AIRE-1 Double Nickase (h) et le plasmide AIRE-1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant AIRE. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: AIRE-1 Antibody (C-2): sc-373703
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) AIRE-1 | sc-401225-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) AIRE-1 | sc-401225-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AIRE (autoimmune regulator) code le régulateur transcriptionnel AIRE-1, un acteur clé de la tolérance immunitaire centrale dans les cellules épithéliales thymiques médullaires. AIRE-1 favorise l'expression ectopique d'antigènes restreints à certains tissus et soutient la sélection négative ainsi que le développement des lymphocytes T régulateurs grâce à des processus transcriptionnels et associés à la chromatine qui façonnent la présentation des antigènes dans le thymus. Une altération d'AIRE perturbe les voies de tolérance et est fortement associée à des phénotypes auto-immuns, notamment les syndromes polyendocriniens auto-immuns et une dysrégulation immunitaire plus large. Ces fonctions font d'AIRE une cible précieuse pour disséquer le contrôle transcriptionnel de la tolérance immunitaire, les réseaux de présentation antigénique et la régulation épigénétique liée au thymus.
AIRE-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AIRE dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AIRE. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AIRE. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AIRE.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.