Plasmide CRISPR/Cas9 KO AIRE-1 (h): sc-401225

Présentation

Le régulateur auto-immun (AIRE ; AIRE-1) est un régulateur transcriptionnel nucléaire qui impose la tolérance immunitaire centrale en favorisant l’expression ectopique d’antigènes restreints à certains tissus dans les cellules épithéliales thymiques médullaires, permettant la sélection négative et façonnant le répertoire des lymphocytes T. AIRE coordonne des processus associés à la chromatine et à la transcription grâce à des interactions avec des marques d’histones et la machinerie transcriptionnelle, soutenant des programmes d’expression génique liés à la sélection thymique et à l’homéostasie immunitaire. L’altération de la fonction d’AIRE est associée à une rupture de la tolérance et à l’auto-immunité, et des programmes transcriptionnels dépendants d’AIRE modifiés ont été étudiés dans le contexte de phénotypes inflammatoires et de dérégulation immunitaire. Par conséquent, AIRE est largement utilisé comme locus modèle pour étudier le contrôle transcriptionnel, la biologie de la présentation des antigènes et les mécanismes régissant la tolérance au soi.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO AIRE-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène AIRE dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du AIRE, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert AIRE à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine AIRE-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en AIRE pour l'étude de la signalisation de AIRE-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de AIRE essentiels à la fonction de AIRE-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de AIRE pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le AIRE-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le AIRE-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus AIRE. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le AIRE-1 plasmide HDR (h) et le AIRE-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie AIRE pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles AIRE définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.