AICAR Double Nickase Plasmid (h): sc-404771-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das AICAR Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- AICAR Double-Nickase-Plasmid (h) und AICAR Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ATIC abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: AICAR transformylase: sc-53612
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
AICAR Double Nickase Plasmid (h) | sc-404771-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AICAR Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404771-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das vom humanen ATIC (AICAR-Transformylase/IMP-Cyclohydrolase) kodierte, mit der Adenosinmonophosphat-Deaminase interagierende Protein ist ein bifunktionelles Enzym, das die letzten beiden Schritte der de-novo-Purinbiosynthese katalysiert, indem es AICAR über die Aktivitäten der 5-Aminoimidazol-4-carboxamid-Ribonukleotid-Transformylase und der IMP-Cyclohydrolase zu IMP umsetzt. Durch die Steuerung der IMP-Produktion trägt ATIC zur Aufrechterhaltung der für die DNA-/RNA-Synthese erforderlichen Nukleotidpools bei und unterstützt die Energiehomöostase in proliferierenden Zellen. Über seine Formyltransferase-Reaktion ist die ATIC-Aktivität mit dem ein-Kohlenstoff-/folatabhängigen Stoffwechsel verknüpft und verbindet so die Purinsynthese mit der Bereitstellung von Methylgruppen und dem Redoxgleichgewicht. Eine Fehlregulation der Purin- und Folatwege wird häufig im Kontext von metabolischem Stress, Genomstabilität und veränderten Proliferationsprogrammen untersucht, wie sie für die Krebsbiologie und die Forschung zu angeborenen Störungen des Purinstoffwechsels relevant sind.
AICAR Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ATIC-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ATIC abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ATIC-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ATIC-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.