Particules Lentivirales d'Activation (h) AHRR: sc-412812-LAC

L’AHRR humain (aryl-hydrocarbon receptor repressor, répresseur du récepteur des hydrocarbures aromatiques) code un répresseur transcriptionnel induisible par ligand qui assure un contrôle en rétroaction négative de l’expression des gènes dépendante de l’AHR. L’AHRR entre en compétition avec l’AHR pour ARNT et se lie aux éléments de réponse aux xénobiotiques afin d’atténuer la transcription des programmes de détoxification et de réponse au stress, modulant ainsi les réponses cellulaires aux ligands environnementaux et aux métabolites endogènes. En modulant les réseaux d’enzymes CYP, la signalisation du stress oxydant et la régulation des gènes inflammatoires, l’AHRR influence la fonction de barrière épithéliale, la polarisation immunitaire et l’homéostasie métabolique. Une activité ou une expression altérée de l’AHRR a été associée à une dérégulation de la signalisation des xénobiotiques et fait fréquemment l’objet d’études dans des contextes tels que la carcinogenèse, les maladies des voies aériennes et l’inflammation à médiation immunitaire.

Les particules d'activation lentivirales AHRR (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de AHRR dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales AHRR (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription AHRR, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de AHRR. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif AHRR ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.