Particules Lentivirales d'Activation (h) AHCYL1: sc-417109-LAC

AHCYL1 (adenosylhomocysteine hydrolase-like 1) code une protéine cytosolique impliquée dans la signalisation dépendante du calcium et les réponses au stress cellulaire, avec des rôles rapportés dans la modulation de la dynamique du Ca²⁺ liée au récepteur de l’inositol 1,4,5‑trisphosphate (IP3R) et des programmes transcriptionnels en aval. En agissant sur la mobilisation du Ca²⁺, AHCYL1 peut influencer des voies qui contrôlent l’apoptose, la prolifération et la différenciation, notamment MAPK/ERK et d’autres nœuds de signalisation sensibles aux variations du flux calcique intracellulaire. Une expression dérégulée d’AHCYL1 ou un contexte de signalisation altéré a été associé à des modifications de la survie cellulaire et à des phénotypes inflammatoires dans des modèles pertinents pour la maladie, ce qui soutient son étude en oncologie, en neurobiologie et en signalisation immunitaire. En tant que gène humain, AHCYL1 est fréquemment évalué pour sa contribution à la transcription dépendante des stimuli, à l’intégration du stress mitochondrial et au dialogue entre voies (crosstalk) piloté par la signalisation des seconds messagers.

Les particules d'activation lentivirales AHCYL1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de AHCYL1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales AHCYL1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription AHCYL1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de AHCYL1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif AHCYL1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.