Plasmide Double Nickase (h) AGXT: sc-407697-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) AGXT correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide AGXT Double Nickase (h) et le plasmide AGXT Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant AGXT. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: AGXT Antibody (173J2B): sc-517624
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) AGXT | sc-407697-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) AGXT | sc-407697-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AGXT humain code l’alanine–glyoxylate aminotransférase, une enzyme peroxysomale dépendante du PLP qui catalyse la transamination du glyoxylate en glycine en utilisant l’alanine comme donneur de groupement aminé. Cette activité est au cœur de la détoxification hépatique du glyoxylate et relie le métabolisme des acides aminés à l’homéostasie peroxysomale, en limitant la conversion du glyoxylate en oxalate. Une altération de la fonction d’AGXT est associée à l’hyperoxalurie primitive de type 1, caractérisée par une production accrue d’oxalate et des dépôts d’oxalate de calcium, ce qui fait d’AGXT un nœud clé pour l’étude du contrôle métabolique peroxysomal. AGXT sert également de gène modèle pour étudier le ciblage subcellulaire, la dépendance aux cofacteurs enzymatiques et les réponses au stress métabolique dans les cellules humaines.
AGXT Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AGXT dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AGXT. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AGXT. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AGXT.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.