AGTPBP1 Double Nickase Plasmid (h): sc-405311-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das AGTPBP1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- AGTPBP1 Double-Nickase-Plasmid (h) und AGTPBP1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf AGTPBP1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: AGTPBP1: sc-134251
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
AGTPBP1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405311-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AGTPBP1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405311-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AGTPBP1 kodiert die zytosolische Carboxypeptidase 1 (CCP1), eine Deglutamylase, die Polyglutamat-Seitenketten an Tubulin und anderen Substraten kürzt, um die Stabilität von Mikrotubuli und den motorproteinabhängigen Transport zu regulieren. Durch die Kontrolle posttranslationaler Tubulinmodifikationen beeinflusst AGTPBP1 die Organisation des Zytoskeletts, die Aufrechterhaltung neuronaler Fortsätze sowie zilienassoziierte Transportwege. Eine gestörte AGTPBP1-Aktivität beeinträchtigt mikrotubuliabhängige Dynamiken und kann in differenzierten Zellen die Proteostase und die Verteilung von Organellen stören. Genetische Veränderungen in AGTPBP1 werden mit neuroentwicklungsbedingten und neurodegenerativen Phänotypen in Verbindung gebracht, was seine Eignung als Ziel für Untersuchungen zur neuronalen Integrität und zur Regulation des Zytoskeletts unterstreicht.
AGTPBP1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des AGTPBP1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von AGTPBP1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die AGTPBP1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit AGTPBP1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.