AGRP Double Nickase Plasmid (h): sc-402410-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das AGRP Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- AGRP Double-Nickase-Plasmid (h) und AGRP Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf AGRP abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: AGRP: sc-517457
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
AGRP Double Nickase Plasmid (h) | sc-402410-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AGRP Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402410-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AGRP kodiert das Agouti-related Protein, ein Neuropeptid, das hauptsächlich von Neuronen im Hypothalamus gebildet wird und als endogener Antagonist bzw. inverser Agonist von Melanocortinrezeptoren – insbesondere MC3R und MC4R – wirkt. Durch die Hemmung der Melanocortin-Signalgebung trägt AGRP zur Regulation der Energiehomöostase, des Fressverhaltens und neuroendokriner Antworten bei, und zwar über miteinander verknüpfte Signalwege, an denen POMC-abgeleitete Peptide sowie leptin-/insulinresponsive Schaltkreise beteiligt sind. Eine veränderte AGRP-Signalgebung wird mit einer Dysregulation der Appetitkontrolle und der Körpergewichtsregulation in Verbindung gebracht und wird häufig im Kontext der Biologie metabolischer Erkrankungen und hypothalamischer Schaltkreise untersucht. Als sezerniertes Peptid stellt AGRP zudem ein gut handhabbares Modell zur Untersuchung von Neuropeptid-Prozessierung, Sekretion und rezeptorvermittelter Signalübertragung in neuronalen Systemen dar.
AGRP Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des AGRP-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von AGRP abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die AGRP-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit AGRP-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.