Plásmido Doble Nickase (h) Agrin: sc-401256-NIC

AGRN codifica la agrina, un gran proteoglicano de heparán sulfato de la matriz extracelular que organiza las interacciones célula–matriz y regula la formación y la estabilidad de las sinapsis. En sinapsis neuromusculares y centrales, la señalización de la agrina coordina el agrupamiento y el mantenimiento de las especializaciones postsinápticas, respaldando vías que controlan la localización de receptores, la remodelación del citoesqueleto y la organización de dominios de membrana. Más allá de la sinaptogénesis, la agrina contribuye a la arquitectura de la membrana basal, la mecanotransducción y la comunicación neuronal y glial. La expresión desregulada de AGRN o el procesamiento de la agrina se han asociado con alteraciones de la integridad sináptica y la remodelación tisular en contextos neuromusculares y neurodegenerativos, lo que respalda su uso como diana en estudios de genómica funcional sobre conectividad y señalización de la matriz extracelular.

Agrin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus AGRN en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de AGRN. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de AGRN. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con AGRN alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.