Agrin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401256

Übersicht

AGRN kodiert Agrin, ein großes Heparansulfat-Proteoglykan der extrazellulären Matrix, das die Zell–Matrix-Signalübertragung und die Spezialisierung von Membranen organisiert. In neuromuskulären und neuronalen Kontexten koordiniert Agrin die Bildung und Stabilisierung von Synapsen, indem es an Rezeptoren wie LRP4 bindet und eine MuSK-abhängige Signalübertragung aktiviert; dadurch werden die Clusterbildung von Acetylcholinrezeptoren und die synaptische Reifung unterstützt. Über die Synaptogenese hinaus beeinflusst Agrin über Interaktionen mit Dystroglykan und Integrinen die Umgestaltung des Zytoskeletts, Zelladhäsion und Mechanotransduktion und prägt so die Gewebearchitektur. Eine dysregulierte Expression oder Prozessierung von AGRN wurde mit Defekten der neuromuskulären Endplatte und einer veränderten synaptischen Homöostase in Verbindung gebracht und wird zudem in Signalwegen untersucht, die mit Fibrose, Neurodegeneration und dem Umbau des Tumormikromilieus verknüpft sind.

Das Agrin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des AGRN-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des AGRN-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von AGRN nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Agrin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von AGRN-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Agrin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf AGRN-Exone abzielen, die für die Agrin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere AGRN-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Agrin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Agrin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des AGRN-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Agrin HDR-Plasmid (h) und Agrin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von AGRN-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten AGRN-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.