Adipsin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401782-ACT

O fator D do complemento (CFD), também conhecido como adipsina, é uma serino protease secretada que atua como a enzima limitante de velocidade da via alternativa do complemento, clivando o fator B ligado ao C3b para gerar a convertase de C3 (C3bBb). Além da amplificação da imunidade inata e da opsonização, a adipsina humana é abundantemente expressa por adipócitos e conecta o estado metabólico à sinalização inflamatória em microambientes do tecido adiposo. A atividade do CFD influencia programas de citocinas dependentes do complemento, o recrutamento de células imunes e o remodelamento tecidual local por meio da sinalização a jusante das anafilatoxinas C3a/C5a. A ativação desregulada do complemento e a expressão alterada de CFD têm sido associadas a fenótipos inflamatórios e metabólicos, incluindo disfunção do tecido adiposo e contextos mais amplos de doenças mediadas pelo sistema imune.

Adipsin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CFD sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Adipsin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CFD em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CFD, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Adipsin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CFD nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Adipsin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Adipsin em células tumorais com expressão de CFD silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.