Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Adenylate cyclase 8/AC8/ADCY8 Double Nickase Plasmid (h): sc-402004-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Adenylate cyclase 8/AC8/ADCY8 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Adenylate cyclase 8/AC8/ADCY8 Double-Nickase-Plasmid (h) und Adenylate cyclase 8/AC8/ADCY8 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ADCY8 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Adenylate cyclase 8/AC8/ADCY8: sc-377323
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Adenylate cyclase 8/AC8/ADCY8 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402004-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Adenylate cyclase 8/AC8/ADCY8 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402004-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane ADCY8-Gen kodiert die Adenylatcyclase 8 (AC8), ein membrangebundenes, durch Ca2+/Calmodulin stimuliertes Enzym, das ATP zu cAMP umsetzt und Calciumsignale mit der Bildung von Second Messengern koppelt. Das durch AC8 erzeugte cAMP aktiviert PKA-, EPAC- und zyklische-Nukleotid-gesteuerte Signalwege und beeinflusst damit CREB-abhängige Transkription, synaptische Plastizität sowie die Reiz-Sekretions-Kopplung in erregbaren Geweben. Durch die Integration von GPCR-Eingängen und der intrazellulären Ca2+-Dynamik trägt ADCY8 zur Regulation neuronaler Signalübertragung, endokriner Antworten und adaptiver zellulärer Homöostase bei. Veränderungen der ADCY8-Expression oder -Signalgebung wurden mit neuropsychiatrischen und kognitiven Phänotypen in Verbindung gebracht und werden im Kontext einer fehlregulierten cAMP-Signalgebung untersucht, wie sie in der Forschung zu neurologischen und metabolischen Erkrankungen beobachtet wird.
Adenylate cyclase 8/AC8/ADCY8 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ADCY8-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ADCY8 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ADCY8-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ADCY8-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.