Plásmido Doble Nickase (h) Adenylate cyclase 8/AC8/ADCY8: sc-402004-NIC

El gen humano **ADCY8** codifica la adenilato ciclasa 8 (AC8), una enzima unida a la membrana y estimulada por Ca2+/calmodulina que convierte ATP en AMPc y acopla las señales de calcio a la producción de segundos mensajeros. El AMPc generado por AC8 activa PKA, EPAC y vías mediadas por canales regulados por nucleótidos cíclicos, modulando la transcripción dependiente de CREB, la plasticidad sináptica y el acoplamiento estímulo-secreción en tejidos excitables. Mediante la integración de entradas de GPCR y la dinámica intracelular de Ca2+, ADCY8 contribuye a la regulación de la señalización neuronal, las respuestas endocrinas y la homeostasis celular adaptativa. Las alteraciones en la expresión o la señalización de ADCY8 se han implicado en fenotipos neuropsiquiátricos y cognitivos, y se estudian en el contexto de la desregulación de la señalización del AMPc observada en investigaciones sobre enfermedades neurológicas y metabólicas.

Adenylate cyclase 8/AC8/ADCY8 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ADCY8 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ADCY8. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ADCY8. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ADCY8 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.