Adenylate cyclase 10/ADCY10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406235

Übersicht

ADCY10 kodiert die Adenylatcyclase 10 (lösliche Adenylylcyclase, sAC), ein intrazelluläres Enzym, das zyklisches AMP als Antwort auf Bicarbonat- und Calciumsignale erzeugt – und nicht infolge einer Aktivierung über G‑Protein‑gekoppelte Rezeptoren. Durch die Ausbildung von cAMP‑Mikrodomänen moduliert ADCY10 die PKA‑ und EPAC‑Signalübertragung und beeinflusst damit Prozesse wie die mitochondriale Funktion, den Ionentransport, die Spermienkapazitation und pH‑Sensorantworten. Von sAC gebildetes cAMP verknüpft metabolische sowie Säure‑Basen‑Signale mit Phosphorylierungsnetzwerken, wirkt auf Transkriptionsprogramme ein und trägt zur Anpassung an zellulären Stress bei. Eine fehlregulierte ADCY10‑Aktivität wurde u. a. im Zusammenhang mit männlicher Infertilität, der Bicarbonatverarbeitung in Niere und Atemwegen sowie einer tumorgebundenen Umprogrammierung der cAMP‑Signalgebung untersucht, was ihre Relevanz für mechanistische Pathway‑Studien unterstreicht.

Das Adenylate cyclase 10/ADCY10 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ADCY10-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ADCY10-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ADCY10 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Adenylate cyclase 10/ADCY10-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ADCY10-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Adenylate cyclase 10/ADCY10-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ADCY10-Exone abzielen, die für die Adenylate cyclase 10/ADCY10-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ADCY10-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Adenylate cyclase 10/ADCY10 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Adenylate cyclase 10/ADCY10 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ADCY10-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Adenylate cyclase 10/ADCY10 HDR-Plasmid (h) und Adenylate cyclase 10/ADCY10 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ADCY10-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ADCY10-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.