Particules Lentivirales d'Activation (h) Adducin α: sc-401693-LAC

ADD1 code l’adducine α, une protéine du cytosquelette membranaire qui coiffe et regroupe les filaments d’actine et favorise l’assemblage du réseau spectrine–actine au niveau du cortex cellulaire. En régulant le remodelage de l’actine, la forme cellulaire et la stabilité membranaire, l’adducine α influence des processus tels que l’adhérence cellule–cellule, la migration et la résistance mécanique, et son activité est modulée par la phosphorylation au sein de voies de signalisation incluant la PKC et le contrôle du cytosquelette lié aux GTPases de la famille Rho. Dans des contextes érythroïdes et épithéliaux, ADD1 contribue à l’organisation membranaire et à l’échafaudage associé au transport ionique, reliant l’architecture du cytosquelette à l’homéostasie cellulaire. Un dérèglement de la fonction de l’adducine et du remodelage du cytosquelette a été associé à des traits complexes et à des troubles impliquant des altérations de la mécanique cellulaire et de la signalisation, faisant d’ADD1 un nœud pertinent pour étudier des phénotypes dépendants du cytosquelette dans les cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Adducin α (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ADD1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Adducin α (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ADD1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Adducin α. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ADD1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.