ADCK5 Double Nickase Plasmid (h): sc-415030-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ADCK5 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ADCK5 Double-Nickase-Plasmid (h) und ADCK5 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ADCK5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ADCK5 Double Nickase Plasmid (h) | sc-415030-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ADCK5 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-415030-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADCK5 kodiert einen mitochondrialen, atypischen protein kinaseähnlichen Faktor aus der Familie der AarF-Domänen-enthaltenden Proteine, der mit der Regulation der mitochondrialen Homöostase und des Kofaktorstoffwechsels in Verbindung steht. Familienmitglieder sind an Signal- und Stoffwechselwegen beteiligt, die mit der Biologie von Coenzym Q (Ubiquinon), der oxidativen Phosphorylierung und dem Redoxgleichgewicht verknüpft sind, wodurch ADCK5 als potenzieller Modulator der zellulären Energieproduktion und des Umgangs mit reaktiven Sauerstoffspezies in Betracht kommt. Störungen dieser Prozesse können mitochondriale Stressantworten, die Anfälligkeit für Apoptose und eine metabolische Umprogrammierung beeinflussen. ADCK5 ist daher relevant für mechanistische Studien zur mitochondrialen Dysfunktion, die sich mit der Biologie neuromuskulärer und neurodegenerativer Erkrankungen sowie mit breiteren Kontexten metabolischer Erkrankungen überschneidet.
ADCK5 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ADCK5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ADCK5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ADCK5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ADCK5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.