ACSL1 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-420278-ACT

Das Mausgen *Acsl1* kodiert die langkettige Acyl‑CoA‑Synthetase 1 (ACSL1), ein Enzym, das langkettige Fettsäuren aktiviert, indem es sie in Acyl‑CoA‑Thioester umwandelt. Dadurch werden Lipidsubstrate auf β‑Oxidation, Phospholipid‑Remodeling und Triglyceridsynthese festgelegt. ACSL1 trägt zur Koordination der zellulären Energiehomöostase und des Lipidhandlings über mitochondrien‑ und ER‑assoziierte Signalwege hinweg bei und beeinflusst Prozesse wie die Dynamik von Lipidtröpfchen und die Membranzusammensetzung. Veränderungen der ACSL1‑Aktivität und der Expressionsmuster werden häufig im Kontext metabolischer Entzündung, Insulinresistenz, hepatischer Steatose sowie kardiovaskulär relevanten Lipid‑Umbauprozessen untersucht, bei denen Verschiebungen in Acyl‑CoA‑Pools Signalwege und die mitochondriale Funktion neu verdrahten können. Daher ist *Acsl1* ein nützlicher Ansatzpunkt, um den Fettsäurestoffwechsel, Nährstoffsensorik und lipidgetriebene Stressantworten in Mausmodellen und Zellsystemen zu untersuchen.

ACSL1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Acsl1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ACSL1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Acsl1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Acsl1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ACSL1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Acsl1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ACSL1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ACSL1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Acsl1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.