Acrp30 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401327-ACT

ADIPOQ kodiert das Adipokin Acrp30 (Adiponektin), ein sezerniertes Protein, das hauptsächlich von Adipozyten produziert wird, als multimerische Komplexe im Blut zirkuliert und die systemische Energiehomöostase reguliert. Acrp30 bindet an Rezeptoren wie ADIPOR1/ADIPOR2 und moduliert dadurch die AMPK- und PPARα-Signalwege, was die Fettsäureoxidation und Glukoseverwertung fördert sowie antiinflammatorische Programme in metabolischen Geweben aktiviert. Veränderte ADIPOQ-Expression und eine gestörte Adiponektin-Signalgebung stehen mit Insulinresistenz, adipositasassoziierter metabolischer Dysfunktion, nichtalkoholischer Fettlebererkrankung und kardiovaskulären Risikophänotypen in Zusammenhang. In Zellmodellen wird ADIPOQ eingesetzt, um die Adipozytendifferenzierung, die Adipokinsekretion und das Zusammenspiel zwischen Fettgewebe sowie Leber-, Muskel- und Immunwegen zu untersuchen.

Acrp30 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ADIPOQ-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Acrp30 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ADIPOQ-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ADIPOQ-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Acrp30-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ADIPOQ-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Acrp30-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Acrp30-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ADIPOQ-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.