Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ACBP Double Nickase Plasmid (h): sc-402557-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ACBP Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ACBP Double-Nickase-Plasmid (h) und ACBP Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DBI abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ACBP: sc-376853
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ACBP Double Nickase Plasmid (h) | sc-402557-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ACBP Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402557-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane DBI-Gen kodiert das Acyl-CoA-bindende Protein (ACBP), ein kleines zytosolisches Lipid-Chaperon, das langkettige Acyl-CoA-Ester bindet und deren Verfügbarkeit für Lipidsynthese, β-Oxidation und Membranumbau puffert. Durch die Regulation des Acyl-CoA-Transports beeinflusst ACBP die metabolische Homöostase, ER-Stressantworten sowie die Kopplung zwischen Lipidstoffwechsel und Signalwegen, die die zelluläre Energiebilanz prägen. Die Aktivität von DBI/ACBP wurde in Zusammenhängen metabolischer Dysregulation, der Biologie von Lipidtröpfchen und stressadaptiven Programmen untersucht, die in Krebs- und Modellen neurodegenerativer Erkrankungen häufig verändert sind. Als multifunktionaler Acyl-CoA-Träger stellt ACBP einen gut untersuchbaren Ansatzpunkt dar, um zu analysieren, wie die Verfügbarkeit von Lipiden Transkriptionsprogramme und Phänotypen auf Organellenebene umprogrammiert.
ACBP Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DBI-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DBI abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DBI-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DBI-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.