ACAT-1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-402300-LAC

ACAT1 kodiert die Acetyl-CoA-Acetyltransferase 1 (ACAT-1), eine mitochondriale Thiolase, die die reversible Kondensation von zwei Acetyl-CoA-Molekülen zu Acetoacetyl-CoA katalysiert und damit die Nutzung von Ketonkörpern sowie den Abbau verzweigtkettiger Aminosäuren unterstützt. Über seine Rolle im mitochondrialen Acetyl-CoA-Fluss trägt ACAT-1 dazu bei, oxidativen Stoffwechsel, Redox-Gleichgewicht und Substratauswahl unter Nährstoffstress zu koordinieren. Eine Dysregulation ACAT1-assoziierter Signal- und Stoffwechselwege wurde mit angeborenen Störungen des Ketonkörper- und Aminosäurestoffwechsels sowie mit veränderten mitochondrialen Stoffwechselzuständen in Verbindung gebracht, die für neuroentwicklungsbezogene und neurometabolische Phänotypen relevant sind. Die Funktion von ACAT-1 wird zudem häufig in Studien zum metabolischen Remodeling in Krebs- und Immunzellen untersucht, bei denen die mitochondriale Kohlenstofflenkung Proliferations- und Differenzierungsprogramme beeinflusst.

ACAT-1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente ACAT1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

ACAT-1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der ACAT1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen ACAT-1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen ACAT1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.