ACADVL (VLCAD) Double Nickase Plasmid (h): sc-403111-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ACADVL Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ACADVL Double-Nickase-Plasmid (h) und ACADVL Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ACADVL abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ACADVL: sc-376239
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ACADVL (VLCAD) Double Nickase Plasmid (h) | sc-403111-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ACADVL (VLCAD) Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403111-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ACADVL kodiert die sehr langkettige Acyl‑CoA‑Dehydrogenase (VLCAD), ein mit der inneren Mitochondrienmembran assoziiertes Flavoprotein, das den ersten Dehydrierungsschritt der β‑Oxidation langkettiger Fettsäure‑Acyl‑CoAs katalysiert. Durch die Initiierung der mitochondrialen Fettsäureoxidation unterstützt VLCAD die Energiehomöostase während des Fastens und in Zuständen hohen Energiebedarfs und trägt zur Bildung von Acetyl‑CoA bei, das nachgeschaltet in den Citratzyklus (TCA‑Zyklus) und die oxidative Phosphorylierung eingespeist wird. Die Funktion von ACADVL ist eng mit dem Lipidabbau, dem mitochondrialen Redoxgleichgewicht und zellulären Antworten auf die Nährstoffverfügbarkeit verknüpft. Störungen von ACADVL sind mit erblichen Erkrankungen der Oxidation langkettiger Fettsäuren assoziiert, wodurch der Locus für die Untersuchung von Phänotypen unter metabolischem Stress und Mechanismen der mitochondrialen Dysfunktion in humanen Zellen relevant ist.
ACADVL Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ACADVL-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ACADVL abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ACADVL-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ACADVL-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.