4E-BP1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400398-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das 4E-BP1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- 4E-BP1 Double-Nickase-Plasmid (h) und 4E-BP1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf EIF4EBP1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: 4E-BP1: sc-9977
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
4E-BP1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400398-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
4E-BP1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400398-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EIF4EBP1 kodiert 4E-BP1, einen durch Phosphorylierung regulierten Inhibitor der cap-abhängigen Translation, der an EIF4E bindet und den Aufbau des EIF4F-Initiationskomplexes hemmt. Die durch mTORC1 vermittelte Phosphorylierung von 4E-BP1 setzt EIF4E frei und fördert so die Proteinsynthese; damit werden die Wahrnehmung von Nährstoffen und Wachstumsfaktoren mit der Translationskontrolle, dem Zellwachstum und der metabolischen Anpassung verknüpft. Dieser Knotenpunkt integriert die PI3K–AKT–mTOR-Signalgebung mit stressresponsiven Programmen und beeinflusst die Expression onkogener und pro-survival mRNAs. Eine veränderte Menge von 4E-BP1 oder sein Phosphorylierungszustand ist in der Krebsbiologie und anderen mTOR-Signalweg-assoziierten Erkrankungen häufig mit dysregulierter Proliferation und einem gestörten Stoffwechsel verbunden.
4E-BP1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des EIF4EBP1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von EIF4EBP1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die EIF4EBP1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit EIF4EBP1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.