Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Plasmide CRISPR/Cas9 KO 4E-BP1 (m): sc-420149
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- 4E-BP1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique 4E-BP1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: 4E-BP1 Antibody (P-1): sc-9977
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO 4E-BP1 (m) | sc-420149 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Le gène murin *Eif4ebp1* code 4E-BP1, un répresseur de la traduction dépendante de la coiffe qui se lie à EIF4E et limite l’assemblage du complexe eIF4F, modulant ainsi l’initiation de la traduction des ARNm en réponse aux signaux nutritionnels et aux facteurs de croissance. 4E-BP1 est un effecteur clé en aval de l’axe PI3K–AKT–mTORC1 ; sa phosphorylation par mTORC1 lève la séquestration d’EIF4E et favorise la traduction sélective de transcrits impliqués dans la croissance cellulaire, le métabolisme et l’adaptation au stress. Par ce point de contrôle traductionnel, *Eif4ebp1* contribue à la régulation de l’autophagie, de la progression du cycle cellulaire et des programmes de protéostasie. Une signalisation 4E-BP1 dérégulée est largement utilisée comme lecture moléculaire d’une activité anormale de la voie mTOR dans des modèles de biologie du cancer, de dysfonctionnement métabolique, ainsi que de processus neurodéveloppementaux et neurodégénératifs.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO 4E-BP1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Eif4ebp1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Eif4ebp1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Eif4ebp1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine 4E-BP1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Eif4ebp1 pour l'étude de la signalisation de 4E-BP1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Eif4ebp1 essentiels à la fonction de 4E-BP1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Eif4ebp1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le 4E-BP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le 4E-BP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Eif4ebp1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le 4E-BP1 plasmide HDR (m) et le 4E-BP1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Eif4ebp1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Eif4ebp1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.