Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
Plasmide CRISPR/Cas9 KO 4.1N (m): sc-420184
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- 4.1N Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique 4.1N, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: 4.1N Antibody (B-2): sc-374367
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO 4.1N (m) | sc-420184 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Epb41l1 code la protéine 4.1N, un membre de la famille des protéines 4.1 enrichi dans les neurones, qui relie le réseau cortical actine/spectrine à la membrane plasmique afin de stabiliser la forme cellulaire et les propriétés mécaniques de la membrane. 4.1N agit comme facteur d’échafaudage au niveau des membranes neuronales et des synapses, en coordonnant l’assemblage de complexes protéiques qui influencent la croissance des neurites, l’organisation synaptique et le trafic vésiculaire. Grâce à ces rôles de couplage entre cytosquelette et membrane, Epb41l1 contribue à des processus tels que le guidage axonal et le remodelage dépendant de l’activité, essentiels au développement et à la plasticité du système nerveux. La dérégulation de l’architecture membrane–cytosquelette associée à 4.1N est pertinente pour l’étude des mécanismes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, dans lesquels une connectivité et une excitabilité neuronales altérées constituent des phénotypes cellulaires majeurs.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO 4.1N (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Epb41l1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Epb41l1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Epb41l1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine 4.1N.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Epb41l1 pour l'étude de la signalisation de 4.1N, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Epb41l1 essentiels à la fonction de 4.1N
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Epb41l1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le 4.1N plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le 4.1N plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Epb41l1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le 4.1N plasmide HDR (m) et le 4.1N (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Epb41l1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Epb41l1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.