14-3-3 ζ Lentiviral Activation Particles (h): sc-400490-LAC

YWHAZ kodiert das menschliche 14-3-3‑Zeta‑Protein, ein phosphoserin-/phosphothreoninbindendes Adapterprotein, das Stabilität, Lokalisation und Aktivität einer Vielzahl von Zielproteinen reguliert. Über breit angelegte Protein-Protein-Interaktionen integriert 14-3-3 Zeta Signale aus PI3K/AKT-, MAPK- und Stressantwort‑Signalwegen und beeinflusst so Zellzyklusprogression, Apoptose und die Dynamik des Zytoskeletts. Seine Netzwerk-Konnektivität verknüpft YWHAZ mit Proteostase und phosphorylierungsabhängiger Checkpoint-Kontrolle, wodurch es in systembiologischen Studien zur Umverdrahtung von Signalnetzwerken häufig im Fokus steht. Eine dysregulierte Expression von 14-3-3 Zeta oder eine veränderte Nutzung von Bindungspartnern wurde in mehreren krankheitsrelevanten Kontexten mit veränderten Proliferations- und Überlebensprogrammen in Verbindung gebracht, was seine Verwendung als mechanistischer Knotenpunkt in Pathway-Analysen unterstützt.

14-3-3 ζ Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente YWHAZ-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

14-3-3 ζ Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der YWHAZ-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen 14-3-3 ζ-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen YWHAZ-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.