κ-casein CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406821

Übersicht

CSN3 kodiert κ-Casein, ein sezerniertes Phosphoprotein, das klassischerweise als Bestandteil von Milch-Caseinmizellen beschrieben ist, wo es zur Löslichkeit von Proteinen und zur Organisation von Calciumphosphat beiträgt. Als extrazelluläres Glykoprotein unterliegt κ-Casein posttranslationalen Modifikationen, die Protein-Protein-Interaktionen und die Sekretionsdynamik beeinflussen, und dient damit als Modellsubstrat zur Untersuchung der Prozessierung im sekretorischen Weg und proteolytischer Spaltung. Obwohl die Biologie von CSN3 am besten im Kontext der Laktation charakterisiert ist, wurde Variation in der κ-Casein-Sequenz und -Glykosylierung mit veränderter Proteinstabilität und der Bildung bioaktiver Peptide in Verbindung gebracht, was es für mechanistische Studien der extrazellulären Proteinprozessierung und Signalübertragung relevant macht. In humanen Systemen dient CSN3 als gut untersuchbarer Locus, um die Regulation der Expression sezernierter Proteine und die nachgeschalteten Effekte proteolyse-abgeleiteter Peptide auf zelluläre Antworten zu analysieren.

Das κ-casein CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CSN3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CSN3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CSN3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die κ-casein-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CSN3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der κ-casein-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CSN3-Exone abzielen, die für die κ-casein-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CSN3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom κ-casein CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom κ-casein CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CSN3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das κ-casein HDR-Plasmid (h) und κ-casein HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CSN3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CSN3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.