γ-GCSmCRISPR激活质粒(h): sc-418078-ACT

GCLM 编码谷氨酸-半胱氨酸连接酶（glutamate-cysteine ligase，γ-GCS）的调节亚基（γ-GCSm），是谷胱甘肽（glutathione，GSH）生物合成限速酶的关键组成部分。γ-GCSm 通过调节全酶的催化效率及其对反馈抑制的敏感性，帮助控制细胞内氧化还原缓冲能力、解毒能力以及巯基稳态。该功能使 GCLM 与氧化应激反应及 NRF2 调控的抗氧化转录程序相联系，从而影响机体对外源性化合物和活性氧（reactive oxygen species，ROS）的易感性。文献报道，GCLM 活性或表达的改变与氧化还原失衡有关，这种失衡与炎症状态、神经退行性变、代谢功能障碍以及癌症相关的应激适应等过程相关。

γ-GCSm CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性GCLM的表达。

γ-GCSm CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的GCLM基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于GCLM转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性γ-GCSm表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的GCLM位点，并能够研究内源性位点上依赖于γ-GCSm的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在GCLM表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟γ-GCSm通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。