Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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γ-GCSc Double Nickase Plasmid (m): sc-420573-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das γ-GCSc Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- γ-GCSc Double-Nickase-Plasmid (m) und γ-GCSc Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Gclc abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: γ-GCSc: sc-390811
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
γ-GCSc Double Nickase Plasmid (m) | sc-420573-NIC | 20 µg | $410.00 |
Gclc kodiert die katalytische Untereinheit der Glutamat-Cystein-Ligase (γ-GCSc), des geschwindigkeitsbestimmenden Enzyms der de-novo-Biosynthese von Glutathion. Durch die Kontrolle der zellulären Glutathionspiegel beeinflusst γ-GCSc die Redoxhomöostase, die Entgiftung elektrophiler Verbindungen und Xenobiotika sowie die Aufrechterhaltung thiolabhängiger Signalwege. Die Gclc-Aktivität ist in Netzwerke der oxidativen Stressantwort eingebunden, einschließlich NRF2-regulierter antioxidativer Programme, und wirkt sich auf die mitochondriale Funktion sowie die zelluläre Anfälligkeit gegenüber reaktiven Sauerstoffspezies aus. Eine dysregulierte Glutathionhomöostase und eine beeinträchtigte Gclc-Funktion wurden in biomedizinischen Modellen mit Phänotypen oxidativer Schädigung in Verbindung gebracht, die für Entzündung, Neurodegeneration, metabolischen Stress und eine erhöhte Empfindlichkeit gegenüber Toxinen relevant sind.
γ-GCSc Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Gclc-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Gclc abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Gclc-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Gclc-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.