Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (m) γ-GCSc: sc-420573-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) γ-GCSc correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide γ-GCSc Double Nickase (m) et le plasmide γ-GCSc Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Gclc. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: γ-GCSc Antibody (H-5): sc-390811
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) γ-GCSc | sc-420573-NIC | 20 µg | $410.00 |
Gclc code la sous-unité catalytique de la glutamate–cystéine ligase (γ-GCSc), l’enzyme limitante de la biosynthèse de novo du glutathion. En contrôlant les niveaux cellulaires de glutathion, γ-GCSc influence l’homéostasie rédox, la détoxification des électrophiles et des xénobiotiques, ainsi que le maintien de la signalisation dépendante des thiols. L’activité de Gclc s’inscrit dans les réseaux de réponse au stress oxydant, notamment les programmes antioxydants régulés par NRF2, et affecte la fonction mitochondriale ainsi que la susceptibilité cellulaire aux espèces réactives de l’oxygène. Une dérégulation du métabolisme du glutathion et une altération de la fonction de Gclc ont été associées à des phénotypes de dommages oxydatifs pertinents pour l’inflammation, la neurodégénérescence, le stress métabolique et la sensibilité aux toxiques dans des modèles biomédicaux.
γ-GCSc Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Gclc dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Gclc. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Gclc. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Gclc.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.