γ-catenin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401640-ACT

JUP kodiert γ-Catenin (Plakoglobin), ein Armadillo-Repeat-Protein, das als zentrale Komponente von Desmosomen und Adhärenzverbindungen (Adherens Junctions) fungiert. Es verknüpft Cadherin-Komplexe mit Intermediärfilamenten sowie mit aktinassoziierten Netzwerken und trägt so zur Integrität epithelialer und kardialer Gewebe bei. Über Interaktionen mit Desmogleinen, Desmocollinen, Plakophilinen und Desmoplakin koordiniert γ-Catenin den Aufbau von Zellkontakten, die Mechanotransduktion sowie die kontaktabhängige Regulation von Zellmigration und -differenzierung. Zudem ist γ-Catenin an der Wechselwirkung mit der Wnt/β-Catenin-Signalgebung beteiligt, indem es Transkriptionsprogramme und die Dynamik der Signalübertragung von Zellkontakten zum Zellkern moduliert. Eine fehlregulierte JUP-Expression oder eine veränderte Lokalisation an Zellkontakten wird mit gestörter Adhäsion, invasivem Verhalten und strukturellen Defekten in Kardiomyozyten in Verbindung gebracht und ist damit relevant für Studien zu Barrierefunktion, Gewebeumbau und krankheitsassoziierter Signalübertragung.

γ-catenin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen JUP-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

γ-catenin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des JUP-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der JUP-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen γ-catenin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native JUP-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von γ-catenin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des γ-catenin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem JUP-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.