δ-casein CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419849

Übersicht

Csn1s2b kodiert δ‑Casein, ein sezerniertes Milchprotein, das in der Milchdrüse exprimiert wird und während der Laktation zur Struktur der Caseinmizellen sowie zur Bindung von Calcium/Phosphat beiträgt. Als Teil des Casein-Genclusters wird seine Transkription während Trächtigkeit und Laktation durch die Prolaktin/JAK2‑STAT5‑Signalgebung und weitere hormonresponsive Signalwege streng reguliert, die die Synthese und Sekretion von Milchproteinen koordinieren. Veränderte Casein-Expressionsmuster werden als Indikatoren für die Differenzierung des Mammadrüsenepithels und die laktogene Kompetenz verwendet, und Gene der Casein-Familie werden in Studien zur Entwicklung der Milchdrüse und zu Stressantworten häufig überwacht. In Mausmodellen können Störungen von Casein-Komponenten Aufschluss über Mechanismen geben, die der Milchzusammensetzung, der neonatalen Ernährung und laktationsbezogenen Phänotypen zugrunde liegen.

Das δ-casein CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Csn1s2b-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Csn1s2b-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Csn1s2b nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die δ-casein-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Csn1s2b-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der δ-casein-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Csn1s2b-Exone abzielen, die für die δ-casein-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Csn1s2b-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom δ-casein CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom δ-casein CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Csn1s2b-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das δ-casein HDR-Plasmid (m) und δ-casein HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Csn1s2b-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Csn1s2b-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.