β-FR Double Nickase Plasmid (h): sc-403346-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das β-FR Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- β-FR Double-Nickase-Plasmid (h) und β-FR Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf FOLR2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: β-FR: sc-293199
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
β-FR Double Nickase Plasmid (h) | sc-403346-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
β-FR Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403346-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FOLR2 kodiert den Folatrezeptor Beta (β‑FR), einen über einen Glycosylphosphatidylinositol-(GPI)-Anker an die Zelloberfläche gebundenen Rezeptor, der reduzierte Folate bindet und deren rezeptorabhängige Aufnahme zur Unterstützung des Ein-Kohlenstoff-Stoffwechsels vermittelt. Durch die Modulation der intrazellulären Folatverfügbarkeit beeinflusst β‑FR die Nukleotidbiosynthese sowie Methylierungsreaktionen, die für Proliferations- und Differenzierungsprogramme essenziell sind. FOLR2 ist in Populationen der myeloischen Linie angereichert, insbesondere in Subsets von Gewebemakrophagen, wodurch seine Expression mit Aktivierungszuständen von Immunzellen und dem Umbau des Mikromilieus verknüpft ist. Eine veränderte FOLR2-Expression wurde mit Entzündungsbiologie und makrophagenassoziierten Merkmalen in verschiedenen Krankheitskontexten in Verbindung gebracht, was FOLR2 zu einem nützlichen Marker und funktionellen Knotenpunkt für mechanistische Studien macht.
β-FR Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FOLR2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FOLR2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FOLR2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FOLR2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.