β-casein Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402248

Panoramica

CSN2 codifica la β-caseina umana, una fosfoproteina secreta che rappresenta una delle principali componenti del latte e contribuisce alla nutrizione neonatale legando calcio e fosfato all’interno delle micelle di caseina. La sua espressione è strettamente regolata durante la differenziazione dell’epitelio mammario e l’allattamento, integrando segnali endocrini attraverso la via del recettore della prolattina–JAK2/STAT5 e vie cooperanti che modellano i programmi secretori. Il livello di trascrizione di CSN2 è comunemente utilizzato come marcatore di una differenziazione lattogenica funzionale e dello stato di sviluppo della ghiandola mammaria in modelli cellulari. La deregolazione dei programmi genici delle proteine del latte, incluso CSN2, è rilevante per gli studi sulla plasticità dell’epitelio mammario e sulla biologia della mammella, in cui firme di differenziamento alterate possono accompagnare fenotipi associati a patologie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO β-casein (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CSN2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CSN2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CSN2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina β-casein.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CSN2 per lo studio della segnalazione di β-casein, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CSN2 critici per la funzione di β-casein
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CSN2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal β-casein CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal β-casein CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CSN2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal β-casein Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR β-casein (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CSN2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CSN2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.