Plásmido Doble Nickase (h) βB2-crystallin: sc-403626-NIC

CRYBB2 codifica la βB2-cristalina humana, una proteína estructural mayoritaria del cristalino ocular que sostiene la arquitectura de las células fibrosas del cristalino y la transparencia a largo plazo. Como miembro de la superfamilia de las β/γ-cristalinas, la βB2-cristalina contribuye al alto empaquetamiento proteico y a las propiedades refractivas, a la vez que mantiene la proteostasis mediante interacciones de tipo chaperona que limitan la agregación bajo estrés oxidativo y asociado al envejecimiento. La alteración de la expresión de CRYBB2 o la desestabilización de la proteína se asocia con la disrupción de la homeostasis del cristalino y con fenotipos relacionados con cataratas, lo que la convierte en un modelo útil para estudiar la estabilidad proteica, las respuestas al estrés y los programas de diferenciación del cristalino. La βB2-cristalina también ofrece un sistema manejable para investigar cómo responden redes conservadas de cristalinas al desequilibrio redox y al estrés proteotóxico en contextos celulares oculares y no oculares.

βB2-crystallin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CRYBB2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CRYBB2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CRYBB2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CRYBB2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.