βB1-crystallin Double Nickase Plasmid (h): sc-403361-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das βB1-crystallin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- βB1-crystallin Double-Nickase-Plasmid (h) und βB1-crystallin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CRYBB1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: βB1-crystallin: sc-374496
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
βB1-crystallin Double Nickase Plasmid (h) | sc-403361-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
βB1-crystallin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403361-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CRYBB1 kodiert das humane βB1‑Kristallin, ein wichtiges Strukturprotein der Augenlinse, das zum hohen Brechungsindex und zur langfristigen Transparenz beiträgt, die für das Sehen erforderlich sind. βB1‑Kristallin ist Teil des Kristallin-Proteinnetzwerks, indem es mit anderen β/γ‑Kristallinen stabile Oligomere bildet und so die Architektur der Linsenfaserzellen sowie die Proteinhomöostase unterstützt. Eine Störung der Kristallinassemblierung oder eine erhöhte Anfälligkeit für Aggregation kann die Linsenklarheit beeinträchtigen, wodurch CRYBB1 ein zentraler Genort für die Untersuchung von Proteostase, Stressantworten und altersbedingten Veränderungen in der Linsenbiologie ist. Varianten, die Stabilität und Löslichkeit von βB1‑Kristallin beeinflussen, wurden mit erblichen Katarakt-Phänotypen in Verbindung gebracht und liefern damit einen genetischen Rahmen für mechanistische Studien in okulären Modellen.
βB1-crystallin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CRYBB1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CRYBB1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CRYBB1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CRYBB1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.