Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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β-Arrestin-2 Double Nickase Plasmid (h): sc-416686-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das β-Arrestin-2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- β-Arrestin-2 Double-Nickase-Plasmid (h) und β-Arrestin-2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ARRB2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: β-Arrestin-2: sc-13140
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
β-Arrestin-2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-416686-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
β-Arrestin-2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-416686-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ARRB2 kodiert das humane β-Arrestin-2, ein multifunktionelles Adapterprotein, das die Signalweiterleitung nachgeschalteter aktivierter GPCRs beendet und umprogrammiert, indem es die Rezeptordesensibilisierung, Internalisierung und das Rezeptor-Trafficking fördert. Über die klassische Entkopplung von G-Proteinen hinaus dient β-Arrestin-2 als Gerüstprotein für Signalmodule wie MAPK/ERK, PI3K–AKT und NF-κB und beeinflusst dadurch Transkriptionsprogramme, zytoskelettale Dynamiken und inflammatorische Antworten. Zudem interagiert es mit der endozytotischen Maschinerie sowie Ubiquitinierungswegen, um das Rezeptorschicksal und die Signaldauer zu regulieren. Eine dysregulierte β-Arrestin‑vermittelte, „biased“ Signalgebung und veränderte ARRB2-Expression wurden mit verschiedenen krankheitsrelevanten Prozessen in Verbindung gebracht, darunter tumorassoziierte Signalwege, Aktivierung von Immunzellen, Fibrose sowie neuropsychiatrische und metabolische Phänotypen.
β-Arrestin-2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ARRB2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ARRB2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ARRB2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ARRB2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.