β2B Tubulin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400059

Übersicht

TUBB2B kodiert β2B‑Tubulin, eine in Neuronen angereicherte β‑Tubulin‑Isoform, die mit α‑Tubulin zu Heterodimeren zusammentritt, um Mikrotubuli aufzubauen und die Integrität des Zytoskeletts zu unterstützen. Die durch Tubulinpolymere getriebene Mikrotubuli‑Dynamik reguliert die Organisation des mitotischen Spindelapparats, den intrazellulären Transport, das Neuritenwachstum und die neuronale Migration und verknüpft TUBB2B damit mit grundlegenden Prozessen wie Zellteilung und Neuroentwicklung. Als Bestandteil des Mikrotubuli‑Zytoskeletts ist β2B‑Tubulin über Interaktionen mit mikrotubuliassoziierten Proteinen und Motorkomplexen in Signalwege eingebunden, die den axonalen Transport und die kortikale Schichtung steuern. Pathogene Varianten in TUBB2B wurden mit Tubulinopathien und Fehlbildungen der kortikalen Entwicklung in Verbindung gebracht und bieten einen genetischen Ansatzpunkt, um zytoskelettale Mechanismen zu untersuchen, die neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen zugrunde liegen.

Das β2B Tubulin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TUBB2B-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TUBB2B-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TUBB2B nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die β2B Tubulin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TUBB2B-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der β2B Tubulin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TUBB2B-Exone abzielen, die für die β2B Tubulin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TUBB2B-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom β2B Tubulin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom β2B Tubulin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TUBB2B-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das β2B Tubulin HDR-Plasmid (h) und β2B Tubulin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TUBB2B-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TUBB2B-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.