α-sarcoglycan CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403837

Übersicht

SGCA kodiert das humane α‑Sarkoglykan, einen zentralen Bestandteil des Sarkoglykan‑Subkomplexes innerhalb des dystrophinassoziierten Glykoproteinkomplexes, der die Membran der Muskelzelle während der Kontraktion stabilisiert. Durch die Verknüpfung der extrazellulären Matrix mit dem kortikalen Zytoskelett unterstützt α‑Sarkoglykan die Integrität des Sarkolemms, die Mechanotransduktion sowie die Organisation von Membran‑Mikrodomänen, die an der Muskelhomöostase beteiligt sind. Eine Störung von SGCA beeinträchtigt den Aufbau des Dystrophin‑Komplexes, erhöht die Anfälligkeit für kontraktionsbedingte Schäden und verändert nachgeschaltete Stress‑ und Entzündungssignale in Skelett‑ und Herzmuskel. Loss‑of‑Function‑Varianten sind mit Phänotypen der Gliedergürtel‑Muskeldystrophie assoziiert, weshalb SGCA häufig als Ziel zur Modellierung von Instabilität der Muskelmembran und verwandten Signalwegen verwendet wird.

Das α-sarcoglycan CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SGCA-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SGCA-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SGCA nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die α-sarcoglycan-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SGCA-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der α-sarcoglycan-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SGCA-Exone abzielen, die für die α-sarcoglycan-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SGCA-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom α-sarcoglycan CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom α-sarcoglycan CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SGCA-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das α-sarcoglycan HDR-Plasmid (h) und α-sarcoglycan HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SGCA-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SGCA-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.