Plasmide CRISPR d'Activation (h) α-actinin-1: sc-400379-ACT

ACTN1 code l’α-actinine‑1 humaine, une protéine de réticulation des filaments d’actine qui se localise aux fibres de stress et aux adhérences focales afin d’organiser le cytosquelette cortical et de soutenir la forme cellulaire, l’adhésion et la migration. En couplant la F‑actine aux complexes d’adhésion, l’α-actinine‑1 contribue à la mécanotransduction et au remodelage dynamique du réseau d’actine lors de processus tels que l’étalement et la motilité. La fonction d’ACTN1 s’articule avec des voies de signalisation dépendantes des intégrines et avec la régulation du cytosquelette, qui influencent la biologie des plaquettes et des mégacaryocytes. La perturbation génétique ou la dérégulation d’ACTN1 a été associée à une macrothrombocytopénie héréditaire et à une production plaquettaire altérée, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude du contrôle cytosquelettique dans l’hématopoïèse et la biomécanique cellulaire.

α-actinin-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ACTN1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

α-actinin-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ACTN1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ACTN1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de α-actinin-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ACTN1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de α-actinin-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie α-actinin-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de ACTN1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.