Chemische Aktivatoren von Esp34 können ihre Wirkung über verschiedene biochemische Wege entfalten, die letztlich zur Phosphorylierung und Aktivierung dieses Proteins führen. Forskolin zum Beispiel aktiviert direkt die Adenylatzyklase, wodurch sich der Spiegel von zyklischem AMP (cAMP) in der Zelle erhöht. Erhöhtes cAMP aktiviert die Proteinkinase A (PKA), und PKA kann dann Esp34 phosphorylieren, was zu dessen Aktivierung führt. In ähnlicher Weise aktiviert PMA (Phorbol 12-Myristat 13-Acetat) die Proteinkinase C (PKC), eine weitere Kinase, die in der Lage ist, Esp34 zu phosphorylieren und damit seine funktionelle Aktivität zu aktivieren. Ionomycin wirkt durch eine Erhöhung der intrazellulären Kalziumkonzentration, die verschiedene kalziumabhängige Kinasen aktivieren kann. Diese Kinasen können sich nach ihrer Aktivierung an Esp34 wenden und es durch Phosphorylierung verändern, wodurch das Protein aktiviert wird.
Im weiteren Verlauf der Aktivierungskaskade sind Calyculin A und Okadainsäure dafür bekannt, dass sie Proteinphosphatasen hemmen. Diese Hemmung verhindert die Dephosphorylierung von Proteinen, einschließlich Esp34, was zu einem anhaltenden aktiven Zustand des Proteins aufgrund einer verlängerten Phosphorylierung führt. Anisomycin aktiviert stressaktivierte Proteinkinasen, was ebenfalls zu einer Phosphorylierung von Esp34 führen kann. Der epidermale Wachstumsfaktor (EGF) bindet an seinen Rezeptor, um eine Signalkaskade in Gang zu setzen, die den ERK/MAPK-Signalweg aktiviert, von dem gut dokumentiert ist, dass er eine Vielzahl von Proteinen, darunter auch Esp34, phosphoryliert und aktiviert. Insulin aktiviert den PI3K/Akt-Signalweg, der ein breites Spektrum an nachgeschalteten Effekten hat, darunter auch die Aktivierung von Esp34. Wasserstoffperoxid ist eine reaktive Sauerstoffspezies, die als Signalmolekül fungiert, um Kinasen zu aktivieren, die in der Lage sind, Esp34 zu phosphorylieren, und 1,2-Dioleoyl-sn-glycerol (DAG) ist ein direkter Aktivator von PKC, das, wie bereits erwähnt, Esp34 phosphoryliert und aktiviert. Spermin beeinflusst zelluläre Kinasen zur Phosphorylierung von Esp34, und Zinkpyrithion kann Stressreaktionswege aktivieren, zu denen Kinasen gehören, die Esp34 zur Phosphorylierung und anschließenden Aktivierung ansteuern. Jede dieser Chemikalien sorgt durch ihren einzigartigen Mechanismus dafür, dass Esp34 durch Phosphorylierung aktiviert wird, was ein gängiger Regulierungsmechanismus für Proteinfunktionen in zellulären Prozessen ist.
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