ZRSR2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423571

Übersicht

Zrsr2 kodiert ZRSR2, ein Zinkfinger-RNA-bindendes Protein, das als zentraler Bestandteil des Spleißosoms fungiert und eine wichtige Rolle bei der Erkennung und Entfernung von Introns des U12-Typs spielt. Über die Regulation der Genauigkeit des Prä-mRNA-Spleißens beeinflusst ZRSR2 die Auswahl von Transkript-Isoformen sowie die Expression von Genen, die an Zellzykluskontrolle, Differenzierung und Stressantworten beteiligt sind. Eine Störung der ZRSR2-abhängigen Aktivität des Minor-Spleißosoms kann zu aberranter Intronretention und weitreichenden Defekten der RNA-Prozessierung führen und verknüpft diesen Signalweg in krankheitsrelevanten Kontexten mit veränderten Programmen der Hämatopoese und von Immunzellen. Als konservierter Spleißfaktor eignet sich das murine ZRSR2 für mechanistische Studien zur Assemblierung des Spleißosoms, zur Biologie minorer Introns und zum nachgeschalteten Umbau des Proteoms.

Das ZRSR2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Zrsr2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Zrsr2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Zrsr2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ZRSR2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Zrsr2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ZRSR2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Zrsr2-Exone abzielen, die für die ZRSR2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Zrsr2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ZRSR2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom ZRSR2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Zrsr2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ZRSR2 HDR-Plasmid (m) und ZRSR2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Zrsr2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Zrsr2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.