ZNF750 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-408278-ACT

ZNF750 kodiert einen Zinkfinger-Transkriptionsfaktor, der als zentraler Regulator der epithelialen Linienfestlegung und der terminalen Differenzierung fungiert, mit wichtigen Funktionen bei der Reifung von Keratinozyten und der Homöostase des mehrschichtigen Epithels. Es moduliert Transkriptionsprogramme, die mit der Bildung der epidermalen Barriere, dem Austritt aus dem Zellzyklus und der Unterdrückung progenitorähnlicher Zustände verknüpft sind, indem es differenzierungsassoziierte Gen-Netzwerke koordiniert steuert. Störungen der ZNF750-Expression werden mit einer fehlregulierten epithelialen Differenzierung und verändertem Proliferationsverhalten in Verbindung gebracht, was ZNF750 für Studien zur Biologie des Plattenepithels und zugehörigen Krankheitsmechanismen relevant macht. Als nukleares DNA-bindendes Protein stellt ZNF750 einen gut untersuchbaren Ansatzpunkt dar, um die transkriptionellen Schaltkreise zu analysieren, die die gewebespezifische Genexpression steuern.

ZNF750 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ZNF750-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ZNF750 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ZNF750-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ZNF750-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ZNF750-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ZNF750-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ZNF750-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ZNF750-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ZNF750-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.