Plasmide CRISPR/Cas9 KO ZNF526 (m): sc-431684

Présentation

Zfp526 code la protéine murine à doigts de zinc ZNF526, un facteur nucléaire putatif de liaison à l’ADN impliqué dans la régulation transcriptionnelle via des interactions, médiées par des doigts de zinc de type C2H2, avec des éléments régulateurs. Comme de nombreuses protéines à doigts de zinc associées à KRAB, ZNF526 devrait participer au silençage génique dépendant de la chromatine ainsi qu’à la modulation de programmes transcriptionnels spécifiques de lignée qui influencent l’état cellulaire et la différenciation. Une expression altérée ou une dérégulation des facteurs de transcription à doigts de zinc peut perturber les réseaux de contrôle épigénétique et les voies de signalisation en aval, offrant un cadre pour étudier des mécanismes de régulation génique pertinents pour des phénotypes du développement et des déséquilibres transcriptionnels associés aux maladies. L’étude fonctionnelle de Zfp526 permet d’examiner comment les interfaces entre facteurs de transcription et chromatine façonnent l’expression génique et l’homéostasie cellulaire dans des systèmes modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ZNF526 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Zfp526 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Zfp526, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Zfp526 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ZNF526.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Zfp526 pour l'étude de la signalisation de ZNF526, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Zfp526 essentiels à la fonction de ZNF526
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Zfp526 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ZNF526 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ZNF526 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Zfp526. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ZNF526 plasmide HDR (m) et le ZNF526 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Zfp526 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Zfp526 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.