Plasmide CRISPR d'Activation (m) ZNF143: sc-423169-ACT

Le gène murin **Zfp143** code le facteur de transcription **ZNF143**, une protéine se liant à l’ADN de manière spécifique de la séquence, qui soutient l’architecture des promoteurs et de vastes programmes transcriptionnels. ZNF143 participe à la transcription dépendante de l’ARN polymérase II, à l’organisation de la chromatine et à la régulation de réseaux de gènes associés au cycle cellulaire et à la réplication, notamment des gènes liés à l’initiation de la réplication de l’ADN et à la stabilité du génome. Par ces activités, les modifications de l’expression de ZNF143 sont fréquemment étudiées dans des contextes de contrôle de la prolifération, de dérégulation transcriptionnelle et de remodelage de l’expression génique en réponse au stress. Dans les modèles murins, **Zfp143** constitue un nœud utile pour disséquer les circuits régulateurs qui influencent les programmes de développement et des états transcriptionnels pertinents pour la maladie.

ZNF143 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Zfp143 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ZNF143 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Zfp143 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Zfp143, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ZNF143. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Zfp143 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ZNF143 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ZNF143 dans les cellules tumorales présentant une expression de Zfp143 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.