ZKSCAN3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-416370-ACT

ZKSCAN3 (Zinkfingerprotein mit KRAB- und SCAN-Domänen 3) ist ein nukleärer, DNA-bindender Transkriptionsfaktor, der SCAN-vermittelte Proteininteraktionen mit einer KRAB-abhängigen Transkriptionsregulation verknüpft. Es moduliert Genexpressionsprogramme, die mit Zellproliferation, Differenzierung und zellulären Stressantworten zusammenhängen, und wurde mit der Regulation von Autophagie- und lysosomenassoziierten Signalwegen in Verbindung gebracht. Eine veränderte ZKSCAN3-Aktivität wurde in verschiedenen Krankheitskontexten beschrieben, darunter Krebserkrankungen, bei denen fehlregulierte Transkriptionsnetzwerke zu invasivem Wachstum und metabolischer Anpassung beitragen. Als Knotenpunkt der Transkriptionskontrolle ist ZKSCAN3 ein nützliches Ziel, um vorgelagerte Signalinputs und nachgelagerte Gensignaturen zu untersuchen, die für onkogene und stressantwortbezogene Biologie relevant sind.

ZKSCAN3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ZKSCAN3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ZKSCAN3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ZKSCAN3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ZKSCAN3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ZKSCAN3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ZKSCAN3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ZKSCAN3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ZKSCAN3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ZKSCAN3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.