Plasmide CRISPR/Cas9 KO Zic2 (h): sc-404720

Présentation

ZIC2 code le facteur de transcription à doigts de zinc Zic2, un régulateur majeur de la mise en place des structures embryonnaires et du développement neural, qui module des programmes d’expression génique contrôlant la spécification du destin cellulaire, la prolifération et la différenciation. Zic2 agit au sein de réseaux transcriptionnels du développement et interagit avec des voies de signalisation qui façonnent la morphogenèse, notamment celles influençant la formation du tube neural et la mise en place de la ligne médiane du prosencéphale. Une altération de l’activité de ZIC2 est associée à des troubles neurodéveloppementaux congénitaux, en particulier l’holoprosencéphalie, et une expression dérégulée a été rapportée dans des études portant sur la biologie des tumeurs et la plasticité de lignée. En tant que régulateur transcriptionnel se liant à l’ADN, Zic2 offre un point d’entrée mécanistique pour étudier le contrôle des interactions enhancers–promoteurs, la transcription dépendante de la chromatine et les circuits de régulation génique du développement dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Zic2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ZIC2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ZIC2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ZIC2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Zic2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ZIC2 pour l'étude de la signalisation de Zic2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ZIC2 essentiels à la fonction de Zic2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ZIC2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Zic2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Zic2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ZIC2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Zic2 plasmide HDR (h) et le Zic2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ZIC2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ZIC2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.