Plasmide CRISPR d'Activation (m) ZHX2: sc-436490-ACT

Le gène murin **Zhx2** code le facteur de transcription **zinc fingers and homeoboxes 2 (ZHX2)**, un régulateur majoritairement nucléaire qui module des programmes d’expression génique contrôlant la différenciation cellulaire, la prolifération et l’homéostasie métabolique. ZHX2 agit au sein de réseaux de répression/activation transcriptionnelle grâce à ses domaines de liaison à l’ADN de type doigts de zinc et homéobox, façonnant des états transcriptionnels spécifiques aux tissus. Dans les systèmes murins, une activité altérée de Zhx2 a été associée à une dérégulation de l’expression génique hépatique, à des phénotypes de développement, ainsi qu’à des effets dépendants du contexte sur la signalisation oncogénique et les programmes suppresseurs de tumeurs. Ces propriétés font de ZHX2 un nœud utile pour disséquer le contrôle transcriptionnel de l’identité de lignée et des circuits de régulation génique associés aux maladies.

ZHX2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Zhx2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ZHX2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Zhx2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Zhx2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ZHX2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Zhx2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ZHX2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ZHX2 dans les cellules tumorales présentant une expression de Zhx2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.