Plasmide Double Nickase (h) ZFP64: sc-410027-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ZFP64 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ZFP64 Double Nickase (h) et le plasmide ZFP64 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ZFP64. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ZFP64 Antibody (F-3): sc-374263
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ZFP64 | sc-410027-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ZFP64 | sc-410027-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ZFP64 (protéine à doigts de zinc 64) est un facteur de transcription présumé à doigts de zinc C2H2, doté d’un domaine KRAB, impliqué dans la liaison à l’ADN spécifique de séquence et la régulation épigénétique de l’expression génique. En recrutant des complexes corépresseurs et des enzymes de modification de la chromatine, ZFP64 est supposée influencer le silençage transcriptionnel, le maintien de l’état de la chromatine et les programmes d’identité cellulaire. Une régulation altérée des réseaux de protéines KRAB à doigts de zinc a été associée à une différenciation dérégulée, à l’instabilité du génome et à des états transcriptionnels oncogéniques, ce qui rend ZFP64 pertinente pour l’étude de la régulation génique associée au cancer et du contrôle du développement. Dans les cellules humaines, l’étude de la fonction de ZFP64 permet une analyse mécanistique des circuits transcriptionnels et des voies dépendantes de la chromatine.
ZFP64 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ZFP64 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ZFP64. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ZFP64. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ZFP64.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.