Plasmide CRISPR d'Activation (h) ZFHX4: sc-408957-ACT

ZFHX4 (zinc finger homeobox 4) code un grand facteur de transcription nucléaire comportant de multiples domaines de liaison à l’ADN de type « doigt de zinc » et homéobox, qui module des programmes d’expression génique contrôlant l’identité cellulaire et la différenciation. Il participe à des réseaux de régulation transcriptionnelle liés aux processus neurodéveloppementaux et aux lignages épithéliaux, en influençant l’état de la chromatine et les sorties de signalisation en aval. Une expression dérégulée de ZFHX4 ou des mutations ont été associées, dans plusieurs contextes, à des trajectoires de différenciation altérées et à la biologie tumorale, ce qui en fait un nœud moléculaire pertinent pour étudier le remodelage transcriptionnel oncogénique. L’étude fonctionnelle de ZFHX4 aide à préciser comment les facteurs de transcription intègrent des signaux développementaux avec le contrôle du cycle cellulaire et des voies d’adaptation au stress.

ZFHX4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ZFHX4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ZFHX4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ZFHX4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ZFHX4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ZFHX4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ZFHX4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ZFHX4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ZFHX4 dans les cellules tumorales présentant une expression de ZFHX4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.