Plásmido CRISPR de Activación (h) ZBTB1: sc-411630-ACT

ZBTB1 (que contiene dedos de zinc y dominio BTB 1) codifica un regulador transcripcional que integra interacciones proteicas mediadas por BTB/POZ con la unión al ADN mediante dedos de zinc C2H2 para moldear programas de expresión génica específicos de linaje y de contexto. En la biología de células hematopoyéticas e inmunitarias, se ha implicado a ZBTB1 en el control de la diferenciación, la proliferación y la estabilidad genómica, conectando el control transcripcional con la respuesta al daño del ADN y el mantenimiento de los estados de la cromatina. Una actividad alterada de ZBTB1 puede perturbar las redes reguladoras que gobiernan el desarrollo linfoide y las respuestas al estrés, lo que la hace relevante para estudios de fenotipos tipo inmunodeficiencia, desregulación hematológica y circuitos transcripcionales oncogénicos. Como factor nuclear, ZBTB1 se explora con frecuencia en el mapeo de vías de represión/activación transcripcional, organización de la cromatina y procesos asociados a puntos de control (checkpoints).

ZBTB1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ZBTB1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ZBTB1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ZBTB1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ZBTB1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ZBTB1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ZBTB1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ZBTB1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ZBTB1 en células tumorales con expresión de ZBTB1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.