Plasmide CRISPR d'Activation (h) Zap3: sc-412693-ACT

Le gène humain YLPM1 code Zap3, une protéine nucléaire impliquée dans le traitement des ARN et la régulation transcriptionnelle via des interactions avec des facteurs du spliceosome et associés à la chromatine. Zap3 a été associée au contrôle de l’épissage des pré-ARNm, à la surveillance des ARNm et à la coordination de programmes d’expression génique influençant la progression du cycle cellulaire et la transcription en réponse au stress. La perturbation de l’expression de YLPM1/Zap3 est donc pertinente pour l’étude, à l’échelle du génome, de la fidélité de l’épissage et de l’homéostasie transcriptionnelle dans les tissus prolifératifs. La dérégulation de ces processus est fréquemment observée dans les cancers et les troubles du neurodéveloppement, ce qui fait de YLPM1 un nœud utile pour des investigations mécanistiques de phénotypes associés au métabolisme de l’ARN.

Zap3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de YLPM1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Zap3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus YLPM1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription YLPM1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Zap3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus YLPM1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Zap3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Zap3 dans les cellules tumorales présentant une expression de YLPM1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.