Zap-70 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423755

概要

Zap70 は、T 細胞受容体（TCR）および CD3 複合体の下流で機能し、抗原認識を細胞内のリン酸化カスケードへとつなぐ中核的なシグナル伝達メディエーターである、細胞質型チロシンキナーゼ ZAP-70 をコードします。TCR が刺激されると、ZAP-70 は CD3 鎖上のリン酸化 ITAM にリクルートされ、LAT/SLP-76 の足場形成を介してシグナルを伝播し、PLCγ1 の活性化、カルシウム流入、MAPK シグナル、ならびに NFAT／NF-κB／AP-1 による転写プログラムを駆動します。マウス免疫学において Zap70 は、胸腺細胞の選択、T 細胞の成熟、エフェクター応答に必須であり、獲得免疫やリンパ球シグナル伝達ネットワークの研究において中心的な分子です。ZAP-70 経路活性の制御異常は、免疫不全、自己免疫、リンパ系悪性腫瘍のモデルとも関連し、シグナル閾値の変化が発生や活性化に影響します。

Zap-70 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるZap70遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Zap70内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Zap70のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Zap-70タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Zap-70シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Zap70欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Zap-70の機能に不可欠なZap70エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Zap70ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Zap-70 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびZap-70 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Zap70遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Zap-70 HDRプラスミド（m）および Zap-70 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはZap70ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のZap70標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。